ENZIMOLOGÍA

OBJETIVOS GENERALES

Comprender el concepto de enzima y conocer sus características generales. Conocer con profundidad los aspectos cinéticos y los mecanismos que subyacen en su actividad. Conocer sus posibilidades ténicas y sus aplicaciones de interés industrial.

PROGRAMA TEÓRICO

1.- Concepto, clasificación y nomenclatura. Características. Determinación de la actividad enzimática. Unidades.
2.- Cofactores. Coenzimas: Cosustratos y grupos prostéticos. Metales.
3.- Cinética Química. Cinética enzimática. Relaciones monosustrato . Relaciones bisustrato. Cinéticas del estado estacionario y relajación.
4.- Inhibición enzimática. Inhibición Reversible e irreversible. Inhibición competitiva, no competitiva y acompetitiva.
5.- Efecto del pH y de la temperatura sobre la actividad enzimática.
6.- Cinética de enzimas con sitios interaccionantes. Fectos homotrópicos y heterotrópicos.
7.- Estrategias catalíticas de las enzimas. Estabilización del estado de transición. Efecto de proximidad y orientación. Catálisis ácido base. Catálisis covalente. Catálisis por distorsión.
8.- Mecanismos de acción de las enzimas. Lisozima, RNAasa, Serinproteasas, Glutation reducta, Aldolasa, aminoacil-tRNA sintetasa, Superóxido dismutasa (efecto Circe).
9.- Aislamiento y purificación de las enzimas. Criterios de pureza.
10.- Tecnología enzimática. Enzimas de interés industrial. Inmovilización de las enzimas y de otros sistemas biocatalíticos. Biosensores, acoplamiento a electrodos. Inmunoensayo con marcaje enzimático. Bioelectrosíntesis.
11.- Optimación de las características de las enzimas. Mutagénesis dirigida. Aplicación industrial. Estabilización química y térmica.

PROGRAMA DE PRÁCTICAS

1.- Cinética enzimática I.
Estudio cinético de la actividad de la tirosinasa de champi–ón. Distribución y aislamiento de la enzima. Medida de su actividad. Cálculo de la KM y Vmax.

2.- Cinética enzimática II
Efecto del PA de la temperatura sobre la actividad de la tirosinasa de champi–ón. Inhibición de su actividad por el ácido cinámico. Cálculo de la KI.

3.- Inmovilización de las enzimas
Inmovilización de la tripsina en sefarosa y en poliacrilamida. Construcción de un reactor con la enzima inmovilizada. Estudios cinéticos.

BIBLIOGRAFÍA

- Enzymology. (Lab Fax Series). PC. Engels. Academic Press. 1996
- Enzymes. M. Dixon y E.C. Webb. Tercera edición. 1.979.
- Enzyme structure and mechanism. A. Fersht. Segunda edición. 1.985.
- Introducción a las aplicaciones de las enzimas. R. Serrano. Primera edición. 1.985.
- Introduction to biocatalysis using enzymes and microorganism. S.M. Roberts, NM. Turner, AJ. Willets, MK. Turner. Primera edición. 1.995.