FUNDAMENTOS DE METODOLOGIA BIOQUIMICA

PROGRAMA

Area : Química Física (10 horas)

1.- Termodinámica.

- Determinación de la constante de equilibrio en una mezcla ceto-enólica por refractometría - Medidas de voltametría cíclica

2.- Cinética de reacción.

- Estudio de ecuaciones cinéticas utilizando técnicas espectroscópicas.

3.- Electroquímica

- Voltametría cíclica del sistema redox ferricianuro-ferrocianuro

Area : Química Analítica (20 horas)

4.- Equilibrio en disolución. Equilibrio ácido-base

- Conceptos básicos sobre el cálculo del pH, concentraciones en función del pH, poder amortiguador del pH. Preparación de tampones de uso corriente en
bioquímica y demostración de su capacidad amortiguadora.
- Volumetría ácido-base de la glicina con electrodo de pH. Obtención de la curva de valoración. Cálculo del poder amortiguador y concentraciones en
diferentes puntos de la curva de valoración.
- Conceptos básicos sobre potencial redox : Ecuación de Nerst.

5.- Técnicas espectroscópicas básicas

- Determinación del pKa de la tirosina por espectrofotometría de absorción molecular.
- Determinación cuantitativa de un compuesto (lactato, etanol...) por espectrofotometría de absorción molecular UV/visible, a través de su reacción con NAD+
catalizada por el enzima correspondiente.
- Estudio de la fluorescencia molecular de una proteína.

Area : Química Orgánica (30 horas)

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6.- Reacciones básicas de Química Orgánica

- Introducción a las técnicas de laboratorio : Seguridad en el laboratorio de química orgánica. Técnicas básicas : filtración, cristalización, extracción,
destilación, sublimación. Técnicas de identificación de productos desconocidos : cambios de fase, polarimetría, cromatografías, espectroscopías.
- Extracción de productos naturales : Técnicas básicas. Extracción de la nicotina del tabaco, de la cafeína del té y de la cafeína del café.
- Colorantes naturales : Separación del licopeno y el caroteno del tomate y de la zanahoria. Caracterización de sus propiedades por espectroscopía visible/UV.
- Química de los aromas y sabores : Síntesis de productos aromáticos por esterificación : acetato de isoamilo, salicilato de metilo. Utilización de las técnicas
espectroscópicas para la caracterización de los productos obtenidos.
- Química de los hidratos de carbono : Utilización de modelos moleculares. Síntesis de derivados sencillos de la glucosa y su estudio por resonancia
magnética nuclear. Síntesis de otros derivados.
- Síntesis por etapas. Preparación de un péptido : Síntesis de Erlenmeyer de la fenilalanina y su utilización en la síntesis de un dipéptido modelo. Purificación
y caracterización espectroscópica.

Area : Bioquímica y Biología Molecular (60 horas)

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7.- Aislamiento y caracterización de proteínas

- Materiales de partida. Homogeneización de tejidos o de células. Precauciones con los extractos crudos.
- Enriquecimiento por precipitación fraccionada. Diálisis.
- Aislamiento de una o varias proteínas utilizando distintas técnicas cromatográficas : cromatografía de intercambio iónico, de exclusión molecular, de
afinidad, etc.
- Cuantificación de proteínas. Criterios de pureza.
- Medida de actividad enzimática y parámetros cinéticos.
- Electroforesis aplicada a las muestras obtenidas en los distintos pasos de la purificación.

8.- Fundamentos de microscopía

- Microscopio óptico. Microscopio de contraste de fase. Microscopio de fluorescencia.

9.- Técnicas de cultivo celular

- Células procariotas : crecimiento de la célula bacteriana. Curvas de crecimiento. Crecimiento en medio sólido y líquido. Requerimientos nutricionales.
- Células eucariotas. Requerimientos nutricionales. Cultivo de líneas celulares tumorales y obtención de un cultivo primario a partir de un tejido animal.
Mantenimiento de las células en cultivo. Elaboración de curvas de crecimiento. Criohibernación y descongelación.

10.- Técnicas de manejo de organismos pluricelulares

- Organismos vegetales. Fundamentos de la organografía vegetal. Cultivo de organismos vegetales con fines experimentales.
- Organismos animales. Fundamentos de organografía animal. Manipulación del animal de laboratorio. Condiciones de mantenimiento y crianza de animales.

BIBLIOGRAFIA

- Secrent, S. y otros. Técnicas instrumentales fisicoquímicas. Universidad Nacional de Educación a distancia, 1990.
- García-Segura y otros. Técnicas instrumentales de análisis en Bioquímica. Ed. Síntesis. 1996.
- D. L. Pavia, G. M. Lampman, G. S. Kriz Jr. Quimica Organica Experimental (productos naturales, compuestos de interés farmacológico e industrial)Eunibar 1978
- H. D. Durst, G. W. Gokel. Quimica Organica Experimental. Ed. Reverte 1985
- Wilson and Walker. Principles and techniques of practical Biochemistry. Cambridge University Press, 4ºed., 1994.
- Bregman, A.A. Laboratory investigations in Cell Biology, 2º ed. Wiley & Sons Inc., 1987.

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Ultima modificación 18 de Octubre de 2004